Metodologia para a detecção de bactérias promotoras de crescimento em tecidos de Brachiaria sp. utilizando ensaios de PCR quantitativa estirpe-específica

Resumo

As bactérias promotoras de crescimento de plantas (BPCP) tornaram-se de interesse de estudo, pois podem influenciar no aumento de produtividade de culturas agrícolas. A técnica de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR) se apresenta como alternativa para o monitoramento da colonização e na avaliação quantitativa de BPCP inoculadas nessas culturas. Nosso objetivo é utilizar a técnica de RT-qPCR como metodologia para localizar e identificar estirpes de Azospirillum brasilense em tecidos de Brachiaria sp.. Cinco estirpes de A. brasilense (Sp245, Sp246, AbV5, AbV6 e FP2) serão identificadas e quantificadas em tecidos de Brachiaria sp. por meio da técnica de RT-qPCR, através de iniciadores (primers) espécie- e estirpe-específicos. As amostras de colmo e raízes de Brachiaria sp. utilizadas para a extração de DNA total são provenientes de experimento de campo disposto em fatorial 3x3, compostos por três variedades de Brachiaria sp. (Paiaguás, Piatã e Basilik) e três fontes de nitrogênio (dois inoculantes bacterianos: comercial e CNPAB e o controle sem adição de N). A avaliação da eficiência da extração com os primers específicos iniciou-se com a extração do DNA bacteriano. O DNA extraído foi quantificado, encontrando-se valores satisfatórios maiores que 60 ng uL^-1. A qualidade do DNA foi confirmada por meio de eletreforese em gel de agarose. Os testes com os iniciadores específicos serão feitos e o DNA dessas estirpes serão utilizadas para contrução de uma curva padrão, necessária para a quantificação das bactérias inoculadas em Brachiaria sp.. Os tecidos de raiz e colmo dos respectivos tratamentos foram macerados para posterior extração do DNA total. O procedimento para quantificação do DNA extraído desses tecidos vegetais foi o mesmo seguido para as bactérias. Espera-se com esta metodologia, identificar bactérias diazotróficas que apresentem interações benéficas com o genótipo de Brachiaria sp., para que possam ser testadas como inoculantes em programas de melhoramento das pastagens.