Isolamento e caracterização química de sideróforos produzidos por Gluconacetobacter diazotrophicus.

Resumo

A bactéria endofítica Gluconacetobacter diazotrophicus isolada da cana-de-açúcar, além de fixar nitrogênio, caracteriza-se por sintetizar fitohormônios, sideróforos, substâncias antagônicas e solubilizar fosfato inorgânico. O ferro é elemento essencial no processo de fixação biológica de nitrogênio, pois está presente nos dois componentes conhecidos como ferro-proteína (Fe-proteína) e ferro-molibdênio proteína (MoFe-proteína), que constituem a enzima nitrogenase, protagonista desse processo. Assim, a disponibilidade de ferro pode impor restrições à expressão, montagem e funcionamento do complexo nitrogenase. Um mutante de G. diazotrophicus, designado Gdiaa31, caracterizado fenotipicamente por acumular sideróforos em condições de crescimento in vitro, foi cultivado em meio LGI-P modificado sob ausência de suplementação férrica. O sobrenadante coletado após centrifugação da suspensão de células, a 10.000 rpm durante 15 minutos, foi passado por coluna de vidro preenchida com a resina XAD-4. A detecção de sideróforos em solução, antes e após os processos de purificação, foi avaliada empregando-se o método cromo azurol S (CAS). Em seguida, as frações sideróforo-positivo foram liofilizadas e purificadas utilizando Sephadex G-25. Para obtenção do sideróforo, a solução obtida com metanol foi concentrada. A presença de sideróforos com estrutura do tipo hidroxamato foi confirmada através dos testes de CSÁKY (1948) e ARNOW (1937). A análise do material coletado por Espectroscopia de Infravermelho e Cromatografia de Camada Delgada (CDD) com solução de ninidrina permitiu determinar alguns grupos funcionais da estrutura química dessa molécula. Análises mais refinadas envolvendo o uso de Espectrometria de Massa de Alta Resolução, Ressonância Nuclear Magnética e Espectroscopia de Infravermelho estão em andamento para uma melhor caracterização da estrutura química da molécula.