Quantificação de bactérias que compõem o inoculante em plantas de cana-de-açúcar por PCR em Tempo Real

Resumo

Cleudison Gabriel Nascimento da Silva¹; Marcia Soares Vidal² & Jean Luíz Simões de Araújo³.

(1) Bolsista de Iniciação Científica do CNPq, Graduando em Agronomia, UFRRJ, cleudison@msn.com; (2) Pesquisadora Embrapa Agrobiologia, marcia.vidal@embrapa.br; (3) Pesquisador Embrapa Agrobiologia, jean.araujo@embrapa.br.

A cana-de açúcar Saccharum officinarum é bastante exigente quanto à adubação nitrogenada, uma grande demanda por esse tipo de fertilizante onera a produção. Uma alternativa ao uso de insumo químico e que também fornece N para cultura é a associação da planta com bactérias capazes de fixar N₂ atmosférico. Em 2008 a Embrapa Agrobiologia lançou um inoculante para cana-de-açúcar composto por cinco estirpes de bactérias, a saber: Gluconacetobacter diazotrophicus, Herbaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae, Azospirillum amazonense e Burkholderia tropica. Vários trabalhos mostram ganho significativo de N por cana-de-açúcar, quando inoculadas com essas bactérias, dai a importância de monitorar a população bacteriana durante o ciclo da cultura.  O objetivo deste trabalho é quantificar por PCR em Tempo Real (qPCR) essas bactérias, através do DNA total extraído de tecidos vegetais, tais como raízes e colmos. O experimento foi montado no campo experimental da Embrapa Agrobiologia, empregando duas cultivares de cana (RB92579 e RB867515) submetidas a dois tratamentos (inoculado e não inoculado), sendo empregado DIC com 4 blocos de 5 parcelas cada. Foram feitas 5 coletas de colmos e raízes desde o plantio até a colheita. O DNA foi extraído empregando o método de CTAB e, posteriormente, as amostras de DNA foram submetidas à Nested PCR sendo amplificado inicialmente fragmento correspondente ao gene 16S e, posteriormente, amplificado fragmento interno deste gene, empregando para tal iniciadores específico para cada estirpe bacteriana.  Foi observada à amplificação tanto do fragmento de 1500 pb do gene 16S rDNA, quanto do fragmento específico para as todas as estirpes que compõem o inoculante, quando foi utilizado DNA de colmo. A partir de agora dar-se-á início as avaliações por qPCR empregando o DNA de colmo das 5 coletas realizadas. Ao final deste trabalho espera-se obter um perfil do estabelecimento das bactérias do inoculante de cana-de-açúcar ao longo do ciclo da cultura.

Palavras chave: Inoculante; cana-de-açúcar; qPCR.