Comparação entre a capacidade de nodulação e presença de fator nif com auxilio da Polimerase Chain Reaction

Resumo

Há décadas existe um grande interesse em fixação biológica de nitrogênio (FBN) em plantas não leguminosas e experimentos independentes de cultivo tem sugerido que rizobios possam ter um papel importante em FBN associadas à cana-de-açúcar, mesmo não tendo nódulos. Logo montamos uma comparação da capacidade de nodulação com a presença de genes responsáveis por fixação de nitrogênio. Seguindo essa linha usamos novas abordagens de isolamento e obtivemos uma coleção de isolados de Bradyrhizobium sp. endofítico a partir de raízes de cana-de-açúcar cultivada no campo experimental da Embrapa Agrobiologia. Essas abordagens de isolamento consistiram em usar suspensão das raízes para inocular feijão-caupí (Vigna unguiculata), que funcionou como planta “isca”, e placas com meio de cultura solido 79. Desta forma obtivemos uma coleção de bactérias das quais algumas foram selecionadas para estudos mais detalhados. Desses isolados fizemos PCR (Polimerase Chain Reaction) para os genes nifH e nodC. Também foi realizado teste de nodulação in vitro com feijão-caupí. Devido a resultados diferentes em repetições de alguns isolados, repetimos o experimento usando esses e mais alguns escolhidos da coleção. Na PCR para o gene nifH tivemos 29 confirmados do total, sugerindo um potencial diazotrófico dos isolados. A PCR para o gene nodC, apresentou 22 isolados com resultados positivos, para os isolados obtidos por  nódulos. Nos isolados obtidos de placa foi observado a presença de nodC em três (AG14, AG46 e M3). Com o teste de nodulação foi verificado a presença de nódulos de acordo com a presença ou ausência do gene nodC verificada pela PCR. Permitindo concluir que Bradyrhizobium spp. ocorrem em cana-de-açúcar e que alguns isolados podem não produzir fator nod.