Análise do perfil de expressão dos genes gumD, cpaB, eglA e luxI em Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5T colonizando plantas de cana-de-açúcar por qRT-PCR

Resumo

Gluconacetobacter diazotrophicus tem sido considerada uma das mais promissoras bactérias endofíticas diazotróficas de cana-de-açúcar para a aplicação agrobiotecnológica, a mesma possui capacidade de fixação de Nitrogênio em associação com plantas de cana, além de outras capacidades fisiológicas interessantes, como: a produção de fitormônios, solubilização do fosfato, zinco e controle de fitopatógenos. Foram identificados alguns genes provavelmente relacionados com a interação planta-bactéria, para os quais mutantes insercionais de PAL5T já se encontram disponíveis na Embrapa Agrobiologia: luxI (sinalização tipo Quorum Sensing); eglA (uma endoglucanase);  gumD (biossíntese de EPS) e cpaB (produção de pili). No presente trabalho, pretende-se avaliar o perfil de expressão dos genes gumD, cpaB, eglA e luxI durante a interação de PAL5T com plantas micropropagadas de cana-de-açúcar. Para tal, plântulas micropropagadas da variedade RB867515 de cana-de-açúcar serão geradas e, posteriormente, inoculadas com a estirpe PAL5T de G. diazotrophicus. Após o estabelecimento da colonização endofítica de cana-de-açúcar por PAL5T, amostras de raiz e folhas serão coletadas e empregadas para extração de RNA total utilizando o reagente TRIzol®.  Após avaliação da qualidade e quantidade do RNA obtido, o mesmo será submetido ao enriquecimento do RNA bacteriano com metodologia específica. De posse de RNA bacteriano enriquecido, este será utilizado na síntese da primeira fita do cDNA com a enzima Superscript III® e, submetido a reações de PCR em Tempo Real (qPCR) empregando iniciadores específicos para cada um dos genes em estudo. Espera-se, com este estudo, uma melhor compreensão sobre o papel dos genes gumD, cpaB, eglA e luxI na colonização de cana-de-açúcar por G. diazotrophicus.