Análise proteômica de membrana externa de Gluconacetobacter diazotrophicus cultivada na ausência de ferro

Resumo

O Ferro é um micronutriente essencial para a maioria dos microrganismos e é requisitado como co-fator para muitas proteínas, como a nitrogenase. Contudo este metal não está biologicamente disponível, pois na maioria das vezes é encontrado na forma insolúvel oxidada (Fe III), o que limita o crescimento bacteriano. Diante desse fato, várias bactérias sintetizem moléculas chamadas sideróforos, que tem a função de formar complexo com o Fe III, que é solúvel em água e permitir o transporte para dentro da célula. Este transporte envolve um complexo de proteínas conhecido transportadores dependentes de TonB. Em um estudo anterior, um mutante tonB:kan de Gluconacetobacter diazotrophicus, designado Gdiaa31, foi gerado pela inserção do transposon Tn5 na região promotora do gene tonB. Foi observado que este mutante acumulou sideróforo no meio, indicando que o mutante foi aparentemente incapaz de realizar a  absorção do próprio sideróforo secretado e que o gene identificado tonB está envolvido na internalização do complexo sideróforo-ferro sob condições limitadas de ferro. Diante do exposto, o presente plano de trabalho tem como objetivo avaliar o perfil de proteínas expressos na membrana externa da estirpe Gdiaa31 em resposta ao cultivo na ausência de Fe empregando análise proteômica. Para tal, as estirpes selvagem e mutante serão cultivadas na ausência de Ferro e, após extração das proteínas da fração correspondente a membrana externa serão separadas por eletroforese bidimensional (2D–PAGE) e as proteínas diferencialmente expressas serão identificadas por espectrometria de massa (MS).