Análises de expressão gênica da bactéria Azospirillum amazonense estirpe CBamc durante atividade de fixação de nitrogênio e após choque de glutamato.

Resumo

O gênero Azospirillum abrange bactérias diazotróficas que são capazes de promover o desenvolvimento vegetal. A. amazonense é uma bactéria associativa que tem sido foco de estudos dado o seu potencial como inoculante em plantas de importante valor econômico. A fim de avaliar a expressão de alguns genes de A. amazonense na atividade de fixação de nitrogênio e em condições de não-fixação, será utilizado o método da RT-qPCR, para quantificação dos transcritos nessas duas condições. Para esse estudo, células de A. amazonense estirpe CBamc serão cultivadas em meio LGI líquido suplementado com sacarose e baixa concentração de glutamato de sódio. Verificada a atividade de fixação de nitrogênio (via ensaios de redução de acetileno), serão coletadas alíquotas no auge da atividade, depois será aumentada a concentração de glutamato e retiradas novas alíquotas. O RNA total será extraído dessas células. A partir dessas amostras, será realizada a transcrição reversa, obtendo-se cDNA. Com o intuito de quantificar os transcritos antes e após o choque de glutamato, será realizada a PCR em tempo real visando quantificar os níveis de expressão de genes de interesse. Com esse trabalho espera-se confirmar os resultados obtidos através da técnica de sequenciamento em larga escala de cDNA (RNA-Seq), confirmando o envolvimento de vias metabólicas de A. amazonense CBAmC na fixação biológica de nitrogênio e no catabolismo de glutamato, um aminoácido-chave no metabolismo de nitrogênio bacteriano.