Seqüenciamento da região 16S rDNA de microrganismo isolados de cultura de cana-de-açúcar.

Resumo

A cana-de-açúcar é uma cultura de grande destaque no cenário nacional através da produção de açúcar e etanol. Sendo uma cultura altamente dependente do adubo nitrogênio para o seu desenvolvimento requer altas doses deste mineral. Bactérias diazotróficas que se associam com a cultura são capazes de fixar o nitrogênio e liberar-lo para a planta. Avanços e inovações de técnicas moleculares baseadas em extração de DNA genômico e análises de sequencia de genes ribossomais como o 16S rRNA (rDNA) permitem identificar este microrganismos. O trabalho teve como objetivo identificar geneticamente as bactérias diazotróficas isoladas de cana-de-açúcar. Visto que estas bactérias foram avaliadas apenas através de testes morfológicos. Foi realizada a extração do DNA genômico utilizado o kit o MiniKit QIAamp® DNA da QIAGEN . O fragmento foi amplificado através da combinação de iniciadores 27F e Amp2. As reações de amplificação foram realizadas em termociclador PTC 100 (MJ Research) com uma etapa de desnaturação (94 °C por 3 min.), seguido de 30 ciclos intermediários (94° C por 1 minuto, 58° C por 1 minuto e 72° C por 2 min), e uma etapa final de extensão (72 °C por 5 min.) seguido por resfriamento (4 °C por 15 min.). Após a amplificação do gene, o produto da PCR foi purificado com o uso do kit Wizard® SV (Promega). Os resultados das sequências foram comparados em bancos de nucleotídeos do NCBI pelo BLAST e no BioCloud-net pelo EzTaxon-e. As sequências foram alinhadas usando o programa CLUSTAL W através do método Neighbor-Joining. A análise filogenética pelo programa MEGA4. Das 40 bactérias analisadas 12 foram semelhantes ao gênero Gluconacetobacter, 13 ao Burkholderia e 3 ao Klebsiella.