Expressão heteróloga do gene cry1Aa de Bacillus thuringiensis kurstaki estirpe S76 e avaliação da atividade entomopatogênica contra larvas da broca da cana-de-açúcar

Resumo

A bactéria Bacillus thuringiensis alcança destaque no agronegócio por possuir propriedades entomopatogênicas, atribuídas aos cristais paraesporais acumulados. Ao serem clivados no intestino do inseto, esses cristais liberam porções tóxicas menores, as delta-endotoxinas, de atividade restrita ao trato digestivo do inseto suscetível. Uma singularidade dessa bactéria é a presença de genes cry em seu material genético. Eles têm função inseticida contra diferentes ordens de insetos, e o gene cry1Aa, em especial, tem ação específica contra a ordem Lepidóptera. O objetivo desse trabalho é avaliar a expressão heteróloga do gene cry1Aa da estirpe S76 de B. thuringiensis e caracterizar sua atividade entomopatogênica contra o inseto Diatraea saccharalis. O gene de interesse cry1Aa será amplificado por meio da técnica de PCR usando como molde o DNA plasmidial da estirpe S76 de B. thuringiensis. Os fragmentos amplificados serão clonados em vetor de clonagem (pCC1) e, em seguida, serão subclonados em vetor de expressão (pET29a), que serão transferidos por eletroporação para células eletrocompetentes de Escherichia coli. Das células recombinantes, será realizada a extração e a quantificação das proteínas para avaliar a expressão. A atividade entomopatogênica da proteína será avaliada por meio de bioensaios com larvas do inseto D. saccharalis.