Expressão Gênica Diferencial em milho Inoculado com a Estirpe BR 11417 de Herbaspirillum seropedicae

Resumo

O Brasil ocupa a terceira posição no ranking mundial de área colhida de grãos de milho, plantando em média 13 milhões de hectares a cada safra. A utilização de fertilizantes químicos nitrogenados em plantas não-leguminosas constitui um dos maiores custos na agricultura. O milho pode ser beneficiado pela associação com bactérias endofíticas diazotróficas; no entanto, diversos aspectos genéticos relacionados com a resposta da planta são poucos caracterizados. Este trabalho tem como objetivo identificar genes diferencialmente expressos em genótipos de milho inoculados com a bactéria Herbaspirillum seropedicae através da técnica cDNA-AFLP. Até o momento foi conduzido o experimento em casa de vegetação para extração do RNA total de dois genótipos de milho inoculados e não inoculados. Este material foi macerado em nitrogênio liquido e o RNA total extraído e utilizado nos experimentos de cDNA-AFLP. Para a realização do experimento de cDNA-AFLP houve o isolamento do RNAm, a síntese da primeira fita cDNA, digestão com enzimas de restrição ligação dos adaptadores, diluição e pré-amplificação do material, posteriormente foi testados diferentes combinações de primers na PCR seletiva. Estas combinações foram testadas em gel de poliacrilamida, e as bandas referentes aos fragmentos derivados de transcritos (FDTs) foram sacados do gel. Foram obtidos 42 fragmentos derivados de transcritos (FDTs) os quais foram reamplificados usando a técnica de PCR. Decidiu-se realizar a precipitação dos fragmentos, esta estratégia possibilitou melhor eficiência para posterior seqüenciamento dos fragmentos